miArrest? miRNA抑制劑
miRNA抑制劑可以特異、高效地抑制生物體內(nèi)源性miRNA的活性,是研究miRNA功能缺失的重要工具。GeneCopoeia提供慢病毒或非病毒載體的miArrest? miRNA抑制劑表達(dá)克隆和化學(xué)合成的miRNA抑制劑。
miArrest? miRNA抑制劑克隆可以特異性地結(jié)合目的miRNA,瞬時(shí)和穩(wěn)定地抑制miRNA的功能,采用H1或者U6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄可以保證在大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)。
HEK293細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染miR-125a 抑制劑表達(dá)質(zhì)粒 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-AM01) 、miR-125a 前體表達(dá)質(zhì)粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶標(biāo)克隆質(zhì)粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT02:將LIN28 的3’UTR克隆到Gaussia熒光素酶-堿性磷酸酶雙報(bào)告載體)。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后檢測(cè)報(bào)告基因Gaussia 熒光素酶和參照基因堿性磷酸酶的活性。只轉(zhuǎn)染Gluc-LIN28-3’-UTR質(zhì)粒的細(xì)胞中Gaussia 熒光素酶與堿性磷酸酶活性比值設(shè)為1 (左數(shù)第一條柱),用來標(biāo)準(zhǔn)化其他細(xì)胞樣品中的報(bào)告基因活性。結(jié)果表明miR-125a抑制了Gluc-LIN28-3’-UTR中Gluc 70%以上的活性(左數(shù)第二條柱)。這種抑制效應(yīng)可被導(dǎo)入的不同劑量的miR-125a抑制劑表達(dá)質(zhì)粒特異性的阻遏。轉(zhuǎn)染100 ng 抑制劑表達(dá)質(zhì)粒時(shí),細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因/參照基因活性比值(右數(shù)第一條)已超出單獨(dú)轉(zhuǎn)染Gluc-LIN28-3’-UTR報(bào)告質(zhì)粒的對(duì)照組。這說明miR-125a抑制劑可以阻遏外源和內(nèi)源性的miR-125a對(duì)靶標(biāo)基因的抑制,提高GLuc-LIN28-3’-UTR轉(zhuǎn)錄本的翻譯水平。
miRNA 抑制劑克隆導(dǎo)入細(xì)胞后表達(dá)的miRNA抑制劑(miArrest)特異地結(jié)合它們的靶miRNA。miRNA抑制劑轉(zhuǎn)錄后折疊形成一個(gè)穩(wěn)定的陷阱結(jié)構(gòu),可以結(jié)合兩分子靶miRNA。
miArrest?高效、特異地結(jié)合細(xì)胞內(nèi)成熟的靶miRNA,阻止了miRNA對(duì)靶標(biāo)mRNA的降解或者翻譯抑制,上調(diào)miRNA靶標(biāo)基因的表達(dá)。
獨(dú)特的載體設(shè)計(jì)確保最大的特異性、抑制強(qiáng)度、抑制作用持久度和最低的脫靶效應(yīng)。
慢病毒載體的miRNA抑制劑表達(dá)克隆
復(fù)能基因提供客戶定制的慢病毒載體miRNA抑制劑表達(dá)克隆,周期2-5周。
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化學(xué)合成的miRNA抑制劑
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miRNA抑制劑表達(dá)克隆套裝
復(fù)能基因除了提供單個(gè)克隆,也提供預(yù)制和定制的miRNA抑制劑表達(dá)克隆套裝。
包括:Human whole genome miRNA inhibitor clone set (lentiviral)、Human cancer miRNA inhibitor clone sets (lentiviral)、Mouse genome miRNA inhibitor clone set (lentiviral)、Rat genome miRNA inhibitor clone set (lentiviral);以及人癌癥miRNA抑制劑克隆套裝 (慢病毒載體),癌癥種類包括: bladder cancer、brain cancer、breast cancer、cervical cancer、cholangiocarcinoma、colorectal cancer、endometrial cancer、gastric cancer、head and neck cancer、hepatocellular carcinoma、kidney cancer、leukemia、lung cancer、lymphoma、melanoma、mesothelioma、myeloma、ovarian cancer、pancreatic cancer、pituitary adenoma、prostate cancer、sarcoma、thyroid carcinoma、uterine leiomyoma。
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