miProfile? miRNA qPCR Arrays
復能基因提供各種miRNA表達差異定量檢測陣列,包括miRNome、 cancer、 disease and focus-group等類型的miRNA檢測陣列目錄產(chǎn)品,同時也提供客戶定制服務。
高通量miRNA表達差異定量檢測陣列
MicroRNAs (miRNAs)是一種在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)基因表達的非編碼小RNAs,長度通常在21-23個核苷酸之間。miRNAs在真核生物中高度保守并在細胞通路中起到重要的調(diào)節(jié)作用。miRNA調(diào)節(jié)基因的異常表達與癌癥、心血管障礙等多種疾病有關(guān)。
miProfile? miRNA qPCR Arrays主要用于對感興趣組織或細胞中miRNA的表達量進行分析,從而發(fā)現(xiàn)與您研究相關(guān)的特異miRNAs。每塊96孔板(或384孔板)包含84 條(或360條)已交聯(lián)在反應孔中的PCR引物(正向:miRNA特異引物;反向:通用引物),同時包含12個(或24個)用于監(jiān)控從反轉(zhuǎn)錄到qPCR反應的每個實驗步驟效率的對照孔。
每條miRNA引物驗證均產(chǎn)生單一擴增產(chǎn)物,融解曲線均呈單一銳鋒,電泳條帶均呈單一條帶,且與目標miRNA相符。由10種人組織混合樣本的總RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA作為引物驗證的模板。
使用通用的實時定量反應條件,即可簡便進行高通量的miRNA表達量檢測和分析。逆轉(zhuǎn)錄試劑All-in-One? miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit 和熒光染料SYBR? Green為基礎的定量檢測試劑All-in-One? qPCR Mix Kit作為被推薦的RT-qPCR試劑與miProfile? miRNA qPCR Array配套使用。該系列試劑均經(jīng)過優(yōu)化,具有高的靈敏度、效率和特異性。
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產(chǎn)品優(yōu)勢
驗證引物:
每條miRNA引物均使用專利算法設計并經(jīng)過實驗確證
性能優(yōu)越:
靈敏度高 – 能檢測低至10 pg小RNA或20 pg總RNA中的miRNA
特異性高 – 能檢測miRNAs單堿基差異,每條引物的擴增效率和特異性均經(jīng)過實驗驗證
線性范圍寬 – 能同時檢測不同表達水平的miRNA
重復性好 – 批間和批內(nèi)高重復性(R2>0.99)
覆蓋范圍廣、目錄產(chǎn)品與客戶定制兼容:
最大可能覆蓋全基因組miRNA
癌癥miRNA組群目錄產(chǎn)品
客戶定制miRNA組群產(chǎn)品
圖 1. miRNA PCR array 實驗流程(左) 和 miRNA RT-qPCR反應原理(右)
性能數(shù)據(jù)
Linear Range and Sensitivity (Total RNA)
以梯度倍比稀釋的人類結(jié)腸癌總RNA為模板,使用All-in-One? miRNA qRT-PCR Detection Kit檢測miR-21 和miR-1260表達量。橫坐標為加入總RNA模板量的對數(shù)值,縱坐標為對應Ct值,實驗數(shù)據(jù)表明,在20 pg到 2 μg總RNA的線性范圍內(nèi),試劑盒具有較高的靈敏度。因此可用于多種miRNA表達量,甚至是低表達miRNA的檢測。
Inter-Array Reproducibility
采用人類總RNA(10種組織混合物)作為樣本,在Bio-Rad iQ5上對miRNA qPCR array (plate A和B)重復性進行分析。計算并比較重復板間的Ct值。結(jié)果顯示批內(nèi)重復性R2 > 0.99。同時,批間重復性也達R2 > 0.99(數(shù)據(jù)未顯示)。
Single Nucleotide Mismatches
Hsa-miR-29a 和 has-miR-29c具有單堿基差異(B)All-in-One miRNA qRT-PCR Detection Kits可以區(qū)分單堿基差異的Hsa-miR-29a和Hsa-miR-29c。miRNA引物分別檢測對應的miRNA模板(靶標序列)及單堿基差異的 miRNA模板(脫靶序列),相對分辨率表示脫靶檢出量與靶標檢出量的百分比(100% x 2 -△Ct)(A)