GLuc-ON? 啟動子報告克隆

GLuc-ON? 啟動子報告克隆在GLuc報告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列，這段插入序列與基因轉錄起始位點（TSS）上游大約1.5kb到下游200bp之間的5’側翼序列一致，可以通過觀察熒光素酶的活性來研究啟動子對基因的調(diào)節(jié)作用。

復能基因可提供預制和定制的GLuc-ON? 啟動子克隆，包括單報告基因載體系統(tǒng)和雙報告基因載體系統(tǒng)。單報告基因載體系統(tǒng)以Gluc、mCherry或GFP作為啟動子的報告基因；雙報告基因載體系統(tǒng)以Gluc作為啟動子報告基因，以分泌型堿性磷酸酶 （SEAP）作為信號標準化的內(nèi)參，可在活細胞中對超過20,000種人和18,000種小鼠啟動子進行實時活性分析。

圖1. GLuc-ON? 啟動子報告克隆的雙報告基因檢測原理圖

產(chǎn)品優(yōu)勢

活細胞分析

    分泌型Gluc報告子

    無需裂解細胞

    節(jié)省樣本，減少突變，簡化試驗流程（如脈沖追蹤分析等）

實時研究

    可獲得即時檢測數(shù)據(jù)

    與實時活性分析過程類似

分泌型雙報告系統(tǒng)

    分泌型Gluc和分泌型堿性磷酸酶

    對多樣本常規(guī)轉染進行精確比較

高通量兼容

    可用于信號通路研究

    可進行高通量研究

高靈敏度

    GLuc比螢火蟲或Renilla熒光素酶靈敏度高1000倍

使用方便

    所有啟動子報告克隆均可直接用于細胞轉染

Gaussia 熒光素酶

GLuc-ON? 啟動子克隆采用經(jīng)過修飾的GLuc（mGLuc）作為報告基因，能產(chǎn)生強烈且穩(wěn)定的熒光信號，克服了人野生型GLuc（wtGLuc）信號衰退快的缺點。

圖2. mGLuc (藍色) 和 wtGLuc (紅色)的信號穩(wěn)定性比較。左側：含有穩(wěn)定劑的緩沖液；右側：常規(guī)緩沖液。

雙報告系統(tǒng)

GLuc-ON? 啟動子克隆可以將分泌型堿性磷酸酶（SEAP）作為第二個報告子和內(nèi)參。這種雙報告系統(tǒng)可以對多樣本常規(guī)轉染進行精確比較。

圖3. 不同啟動子在H1B1B和HEK293T細胞中的活性分析。雙報告系統(tǒng)啟動子克隆和對照以兩個重復轉染進兩種細胞中。轉染24小時（(HEK293T）和48小時（H1B1B）后分析樣品。NEG（包含非啟動子序列）和EMPTY（載體不含啟動子）作為陰性對照。

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