NGSquant? Library qPCR Kit for Ion Torrent?
適用于Ion Torrent 二代測序平臺的文庫定量試劑盒
NGSquant? Library qPCR Kit for Ion Torrent 是一套基于 qPCR 方法對 Ion Torrent 平臺測序文庫進(jìn)行 DNA 分子數(shù)絕對定量分析的試劑盒。它可以對兩端含有 Ion Torrent A、trP1 芯片序列的各種類型 DNA 片段文庫進(jìn)行高特異性的快速定量,檢測結(jié)果靈敏度高,準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好,適用于大多數(shù)qPCR儀器。
產(chǎn)品優(yōu)勢
靈敏度高 —能檢出低至 0.0083 pM 的文庫樣品;
特異性強(qiáng) —使用抗體修飾法熱啟動 DNA 聚合酶,避免了 PCR 擴(kuò)增前的非特異性結(jié)合;文庫定量引物采用特殊算法設(shè)計,不會形成引物二聚體;
擴(kuò)增范圍廣—能檢測平均片段長度 1 kb 以內(nèi)的文庫;
擴(kuò)增效率高(E>0.92),實驗重復(fù)性好(R2 >0.99)。
本試劑盒包含以下四種成分:
1. 文庫DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品(qPCR DNA standard for Ion Torrent):經(jīng)過精確定量和嚴(yán)格質(zhì)控的六份十倍比梯度稀釋的雙鏈DNA片段溶液(83 pM – 0.00083 pM),用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制作;
2. 文庫定量引物(qPCR primer Mix for Ion Torrent):匹配Ion Torrent A和trP1芯片序列、并經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計的一對qPCR引物;
3. 2×qPCR預(yù)混液(2×qPCR Mix for Ion Torrent):含有經(jīng)性能優(yōu)化的熱啟動DNA聚合酶、qPCR反應(yīng)緩沖液和SYBR Green染料等qPCR反應(yīng)所需成分;
4. ROX參比染料(ROX Reference Dye)。
圖1.DNA標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增曲線與熔解曲線。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Ion Torrent檢測6個10倍梯度稀釋的文庫DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品,每個標(biāo)準(zhǔn)品平行重復(fù)2次。結(jié)果顯示,試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特性。
圖2.DNA標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Ion Torrent擴(kuò)增文庫DNA標(biāo)準(zhǔn)品得到的qPCR產(chǎn)物,電泳顯示條帶均一,無非特異擴(kuò)增現(xiàn)象。
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