HDR donor載體及克隆服務(wù)
同源重組(HR)是一種修復(fù) DNA 雙鏈斷裂(DSB)的自然機(jī)制。靶向特定位點的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 體系能夠在基因組上生成 DSB,觸發(fā) DNA 的自然修復(fù)機(jī)制,誘導(dǎo)基因組與供體 DNA 之間發(fā)生同源重組(HR),將供體DNA 片段整合到基因組上的靶標(biāo)位點來修復(fù) DSB。
這個過程對基因組編輯操作具有極大的價值。按照實驗需求構(gòu)建的各種供體質(zhì)粒能在基因組序列中引入多種的修飾。研究者能通過整合報告基因或篩選標(biāo)記干擾基因的編碼區(qū)序列,達(dá)到基因敲除的目的,或通過敲入突變序列進(jìn)行各種閱讀框操作,或者在內(nèi)源基因序列上融合標(biāo)簽以對基因進(jìn)行追蹤等等。
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圖1. 同源重組介導(dǎo)的基因組編輯
通過CRISPR/TALEN工具制造DNA 雙鏈斷裂介導(dǎo)同源重組,將供體克隆上的報告基因和篩選標(biāo)記表達(dá)結(jié)構(gòu)靶向整合到基因組上的目標(biāo)位點。
供體載體
GeneCopoeia 提供標(biāo)準(zhǔn)或客戶定制的供體克隆載體,用于基因敲除、突變修飾、融合標(biāo)簽及其他方面的應(yīng)用。我們提供帶有不同元件的多種載體骨架,可供客戶根據(jù)自己的實驗需要進(jìn)行選擇。
兩個多克隆位點(MCS),用于裝載左側(cè)及右側(cè)同源臂序列。
含GFP(可選)等報告基因,用于陽性克隆細(xì)胞分選。
含篩選標(biāo)記,如嘌呤霉素和新霉素抗性基因,用于篩選陽性克隆。
含TK 篩選標(biāo)記(可選),用于負(fù)篩選去除含有隨機(jī)整合的克隆。
含 LoxP 位點(可選),方便在后續(xù)實驗中通過Cre-LoxP重組去除整合到基因組中的篩選標(biāo)記或報告基因序列。
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供體克隆服務(wù)
GeneCopoeia 也提供供體克隆設(shè)計及/或客戶定制服務(wù)以及基因組編輯項目咨詢服務(wù)。請點擊填寫表格詢價。
基因敲除供體克隆
如圖所示的供體克隆設(shè)計構(gòu)建服務(wù)是用于同源重組介導(dǎo)的基因敲除。這類供體克隆能將篩選標(biāo)記/報告基因表達(dá)結(jié)構(gòu)敲入基因組上的靶點,既破壞了基因的閱讀框達(dá)到敲除的目的,也使得藥篩或熒光分選陽性細(xì)胞系成為可能。這種方法特別適合應(yīng)用于轉(zhuǎn)染效率偏低的細(xì)胞系,而且同源重組介導(dǎo)的基因敲除還有突變序列已知的優(yōu)點。
用于條件性基因敲除、突變修飾和融合標(biāo)簽的供體克隆
如圖所示的供體克隆設(shè)計構(gòu)建服務(wù)是用于同源重組介導(dǎo)的基因敲入應(yīng)用。這類應(yīng)用包括1)條件性基因敲除(在外顯子兩端插入loxP位點,可利用Cre-loxP重組反應(yīng)敲除該外顯子);2)基因突變修飾(通過改變特定堿基突變野生型的基因,或?qū)⑼蛔兓蛐迯?fù)回野生型);3)基因融合標(biāo)簽(在基因的5‘或3’插入融合標(biāo)簽蛋白的基因)。此類供體克隆構(gòu)建服務(wù)請?zhí)顚懸韵卤砀裨儍r。