All-in-One? qPCR Mix and Validated Primers
All-in-One? qPCR Mix
All-in-One qPCR mix試劑與基因特異引物在通用的qPCR反應(yīng)條件下配套使用,即可獲得可靠的實驗數(shù)據(jù)。兩種產(chǎn)品經(jīng)共同開發(fā)并進行一體化優(yōu)化,表現(xiàn)出了如您所期望的、無需任何高成本的全范圍優(yōu)勢。
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產(chǎn)品優(yōu)勢
均一化的反應(yīng)條件縮短實驗設(shè)計時間,更早提交論文
高擴增效率和靈敏度(甚至是低豐度基因)意味著每次實驗中的可靠定量
無非特異性擴增和二聚體,確??芍貜托院蛿?shù)據(jù)可靠性
All-in-One qPCR mix使用高保真熱啟動酶、經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液和高質(zhì)量dNTPs,能夠使低豐度RNA(cDNA)或DNA進行特異的、靈敏的擴增。
圖1.用梯度稀釋的質(zhì)粒DNA(5×106至5個分子)做標準曲線來評估All-in-One? qPCR Mix的擴增效率和檢測靈敏度。如擴增曲線和熔解曲線所示,All-in-One? qPCR Mix可擴增低至5個分子的模板(質(zhì)粒DNA)說明了擴增和檢測的高靈敏度。
All-in-One 編碼基因驗證引物
使用復能基因精確的qPCR試劑產(chǎn)品可消除繁冗的調(diào)整和優(yōu)化過程。只需選擇All-in-One驗證引物即可開始。
All-in-One人、小鼠或大鼠的qPCR反應(yīng)特異引物由專利算法設(shè)計,并為準確定量而進行了驗證。驗證結(jié)果包括熔解曲線,以保證擴增正確靶DNA序列(見圖2.)。
與基于SYBR? Green I的All-in-One qPCR Mix試劑配套使用,All-in-One驗證引物在qPCR定量實驗中表現(xiàn)出可靠、可重復的高效性。
圖2. 45對基因特異引物經(jīng)過實驗驗證均產(chǎn)生單一擴增產(chǎn)物,融解曲線均呈單一銳鋒,電泳條帶均呈單一條帶,且與目標基因相符。由10種人組織(肺、肝、睪丸、卵巢、脾、腦、胎盤、胰、心和乳腺)混合樣本的總RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA作為引物驗證的模板。qPCR反應(yīng)由終濃度0.2 uM的引物和All-in-One qPCR Mix配合完成。使用Bio-Rad iQ5 qPCR儀器,在95°C預變性10分鐘后,緊接著40個PCR循環(huán)(95°C變性10秒,60°C退火20秒鐘,72°C延伸15秒),最后一個循環(huán)后設(shè)置72至95°C的熔解曲線檢測程序。擴增曲線、熔解曲線和瓊脂糖凝膠電泳圖如圖所示(驗證的陽性結(jié)果見奇數(shù)泳道,陰性對照結(jié)果(NTC)見偶數(shù)泳道)。
注釋:1.以上無非特異性擴增和二聚體的驗證結(jié)果均建立于本公司配套試劑產(chǎn)品和反應(yīng)體系之上。2.以上驗證引物包括人、小鼠和大鼠,如需其他物種請咨詢。