| 貨號(hào) | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 形式 | 說明書 |
|---|
產(chǎn)品信息
相關(guān)產(chǎn)品
CytoCt? Cell Lysis Kit
CytoCt? RT-qPCR體系應(yīng)用于試管或96孔板培養(yǎng)的10-100,000細(xì)胞基因表達(dá)水平的檢測(cè)，該體系無需任何RNA純化，操作更簡(jiǎn)便、快捷，靈敏度更高，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更可靠。傳統(tǒng)的方法是對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行提取和純化RNA，然后用RT-qPCR體系進(jìn)行基因表達(dá)定量和分析。CytoCt? RT-qPCR體系在96孔板或其他形式培養(yǎng)的細(xì)胞中制備細(xì)胞裂解物，無需RNA提取步驟，細(xì)胞裂解物通過two-step或者one-step RT-qPCR，在約1.5h即可完成基因定量檢測(cè)。
GeneCopoeia提供的CytoCt? RT-qPCR體系包括：CytoCt? cell lysis buffer（只含裂解液）、CytoCt? cDNA synthesis kit（含裂解液、cDNA合成試劑）和CytoCt? One-Step RT-qPCR kits（含裂解液、一步法RT-qPCR試劑）。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
操作簡(jiǎn)便：在96孔板或試管中快速地將細(xì)胞裂解，無需RNA提取，裂解物可直接進(jìn)行基因定量檢測(cè)
靈敏度高：可對(duì)10-100,000細(xì)胞裂解物進(jìn)行有效的基因檢測(cè)
兼容性：CytoCt? RT-qPCR系統(tǒng)兼容SYBR Green和Probe檢測(cè)體系
重復(fù)性：實(shí)驗(yàn)步驟少，孔間的操作誤差減少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有更高的重復(fù)性
如需訂購，請(qǐng)點(diǎn)擊跳轉(zhuǎn)商城
操作流程
將細(xì)胞培養(yǎng)到所需的細(xì)胞數(shù)，然后加入裂解液，在室溫下孵育10分鐘。轉(zhuǎn)移到PCR板上，運(yùn)行程序：25℃ 2分鐘，37℃ 5分鐘，75℃ 10分鐘。裂解物可以直接進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)，或者儲(chǔ)存起來以備將來使用。
圖一：CytoCt? RT-qPCR體系的靈敏度（試管、96孔板）。
A.在試管中的應(yīng)用，使用GeneCopoeia、Ambion或BioRad的裂解緩沖液裂解HCT116細(xì)胞，使用GAPDH基因進(jìn)行RT-qPCR分析。取濃度范圍為5 ~ 5000個(gè)細(xì)胞每微升的懸浮細(xì)胞與裂解緩沖液混合，按照各產(chǎn)品的操作說明書進(jìn)行處理。每RT-qPCR反應(yīng)使用2μl細(xì)胞裂解液(相當(dāng)于1-1000個(gè)細(xì)胞每反應(yīng))。
B.在96孔板中的應(yīng)用，H1299細(xì)胞接種于96孔板中，密度梯度為每孔250 ~ 5000個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)96小時(shí)后，每孔的最終細(xì)胞數(shù)估計(jì)約為2500~ 50000個(gè)細(xì)胞，向孔板中加入裂解緩沖液，按照操作說明書進(jìn)行處理。每RT-qPCR反應(yīng)使用2μl細(xì)胞裂解液(相當(dāng)于10-200個(gè)細(xì)胞每反應(yīng))。
圖二：使用常規(guī)RNA提取法及CytoCt?裂解法分別處理相同數(shù)量的細(xì)胞，通過One-Step RT-qPCR檢測(cè)基因表達(dá)情況。每個(gè)反應(yīng)的細(xì)胞量約為1500個(gè)。A. 檢測(cè)HCT116細(xì)胞中的42個(gè)基因。B. 檢測(cè)H1299細(xì)胞中的37個(gè)基因。
圖三：使用Genecopoeia（縱坐標(biāo)）和BioRad（橫坐標(biāo)）的lysis buffer分別處理相同數(shù)量的細(xì)胞，通過One-Step RT-qPCR檢測(cè)基因表達(dá)情況。每個(gè)反應(yīng)的細(xì)胞量約為1500個(gè)。A. 檢測(cè)HCT116細(xì)胞的43個(gè)基因。B. 檢測(cè)H1299細(xì)胞中的37個(gè)基因。
圖四：在96孔板中使用細(xì)胞裂解液進(jìn)行多基因檢測(cè)。將3000 – 5000個(gè)HEK293細(xì)胞接種在96孔板中培養(yǎng)，至細(xì)胞達(dá)到70% – 90%的豐度。分別使用GeneCopoeia、BioRad的裂解液以及RNA提取試劑按使用說明處理等量細(xì)胞，使用一步法RT-qPCR試劑，檢測(cè)8個(gè)基因的表達(dá)。