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CRISPR-Cas9 產(chǎn)品與服務(wù)
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GeneHero? Cas9 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
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GeneHero? Cas9 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株

GeneHero? Cas9 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系

復(fù)能基因 提供 Cas9 核酸酶的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。這些細(xì)胞系能為您的 CRISPR 基因組編輯應(yīng)用提供一個(gè)方便、高效的工具。

我們會(huì)提供預(yù)制的GeneHero? Cas9 人類(lèi)或小鼠穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被穩(wěn)定整合到這些細(xì)胞系基因組上的 safe harbor 位點(diǎn)(圖1)。此外,我們也能將 Cas9 核酸酶基因穩(wěn)定整合到您所指定的細(xì)胞系基因組。

Cas9 核酸酶與 sgRNAs 這個(gè)組合被廣泛用于在真核細(xì)胞乃至動(dòng)物模型上生成靶向基因組修飾,包括基因敲除、突變修飾、內(nèi)源基因融合標(biāo)簽以及更多其他應(yīng)用。而基因組上的 safe harbor 位點(diǎn)整合了 Cas9 基因的單克隆人類(lèi)細(xì)胞系能保證該基因表達(dá)的安全性、可靠性以及持續(xù)性。


產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

    Cas9 穩(wěn)定整合將 sgRNA 共轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)導(dǎo)操作的需求降到最低,是高通量 sgRNA 應(yīng)用的理想選擇。

    Safe Harbor 位點(diǎn)整合能確保穩(wěn)定的 Cas9 表達(dá),同時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)副作用。

    單克隆細(xì)胞系能保證單一基因背景下持續(xù)的、高水平的 Cas9 表達(dá)。

    可配合復(fù)能基因 GeneHero? sgRNA 克隆sgRNA文庫(kù)以及供體克隆服務(wù)使用。


CBh-Cas9-AAVS1

圖 1. Cas9 核酸酶穩(wěn)定表達(dá)結(jié)構(gòu)的示意圖。Cas9 核酸酶基因被裝載到到 GeneCopoeia 的人類(lèi) AAVS1 safe harbor 敲入克隆載體。該載體的結(jié)構(gòu)配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技術(shù),能將 Cas9 核酸酶基因敲入到人類(lèi)第19號(hào)染色體上的 AAVS1 位點(diǎn)。單克隆分離通過(guò)嘌呤霉素(Puro)藥篩實(shí)現(xiàn)。


人類(lèi)基因組 AAVS1 位點(diǎn)上的穩(wěn)定整合確保了 Cas9 核酸酶基因持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)。通過(guò)以下的 T7 核酸內(nèi)切酶 I 錯(cuò)配酶切檢測(cè),我們可以看到 在 AAVS1 位點(diǎn)上 的Cas9 核酸酶基因表達(dá)量及活性水平都相當(dāng)高。(圖2)

Cas9 stable cell lline T7EI assay validation

圖 2. 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系活性驗(yàn)證。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 AAVS1 位點(diǎn)穩(wěn)定整合 Cas9 核酸酶基因的人類(lèi) H1299 細(xì)胞系。24 小時(shí)后,收集細(xì)胞用于取基因組 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 檢測(cè)體系擴(kuò)增sgRNA靶向的序列區(qū),對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行解鏈和退火處理,對(duì)照組不作處理,實(shí)驗(yàn)組用 T7 核酸內(nèi)切酶進(jìn)行錯(cuò)配酶切。實(shí)驗(yàn)組酶切產(chǎn)物跑膠獲得預(yù)期的酶切條帶,即能證明 Cas9 在這些細(xì)胞系中有活性。 


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CRISPR-Cas9 產(chǎn)品與服務(wù)

? Cas9蛋白

大腸桿菌表達(dá)的Streptococcus pyogenes(釀膿鏈球菌)Cas9蛋白。Cas9蛋白具有核定位序列(NLS),兩種類(lèi)型可選,不帶標(biāo)簽/C-端帶6×His標(biāo)簽。

? GeneHero? Cas9 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株

提供 Cas9 核酸酶的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,為您的 CRISPR 基因組編輯應(yīng)用提供一個(gè)方便、高效的工具。

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RNA導(dǎo)向的精確、靈活的基因組編輯工具。

預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株

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為dCas9-KRAB穩(wěn)定表達(dá)的單克隆細(xì)胞株,是研究基因表達(dá)抑制和基因篩選的理想方法。

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為dCas9-VP64/MPH基因穩(wěn)定表達(dá)的單克隆細(xì)胞株,是研究基因表達(dá)激活和基因篩選的理想方法。

sgRNA 文庫(kù)

? GeneHero? sgRNA 文庫(kù)

通過(guò)基因敲除實(shí)現(xiàn)功能缺失型篩選,是哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)基因分析、促進(jìn)基因研究、基因組級(jí)別功能調(diào)查(如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路)以及藥物研究(如靶標(biāo)甄別和藥物機(jī)制研究)的強(qiáng)大工具。

啟動(dòng)子報(bào)告克隆

? GLuc-ON? 啟動(dòng)子報(bào)告克隆

可以通過(guò)觀察熒光素酶的活性來(lái)研究啟動(dòng)子對(duì)基因的調(diào)節(jié)作用。