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預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
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GeneHero? CRISPRi 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
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GeneHero? CRISPRi 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株

GeneHero? CRISPRi預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株

GeneHero?預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株是穩(wěn)定表達dCas9-KRAB融合蛋白的哺乳動物細胞系,用于研究內(nèi)源性基因的轉(zhuǎn)錄抑制。這些CRISPRi細胞株已穩(wěn)定整合人密碼子優(yōu)化的dCas9,并與轉(zhuǎn)錄抑制肽KRAB融合,以沉默靶基因的表達。

GeneHero? CRISPRi預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株為dCas9-KRAB穩(wěn)定表達的單克隆細胞株。使用時只需簡單地將啟動子靶向的sgRNA或CRISPRi sgRNA文庫導(dǎo)入CRISPRi細胞系,是研究基因表達抑制和基因篩選的理想方法。

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在GeneHero? CRISPRi細胞系進行CRISPRi轉(zhuǎn)錄抑制驗證

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如上圖所示,在表達dCas9-KRAB的Hela細胞(Cat#SL372)中,用qPCR檢測了DPH2的轉(zhuǎn)錄抑制情況。轉(zhuǎn)導(dǎo)sgRNA的細胞株的擴增曲線為紅色,無sgRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞為藍色(圖A)。目的基因的轉(zhuǎn)錄水平與GAPDH的轉(zhuǎn)錄水平進行了比較,通過與不轉(zhuǎn)染sgRNA的細胞系比較,表明目的基因在SL372中的轉(zhuǎn)錄倍顯著抑制(圖B)。


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