GeneHero? CRISPRa 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
GeneHero?穩(wěn)定表達(dá)協(xié)同激活介質(zhì)(SAM)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞株,可用于內(nèi)源性基因轉(zhuǎn)錄激活的研究。這些細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)C端融合人密碼子優(yōu)化的dCas9的轉(zhuǎn)錄激活子VP64,同時(shí)也穩(wěn)定表達(dá)激活輔助蛋白復(fù)合物MPH(MS2-p65-HSF1)。
GeneHero? CRISPRa預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株為dCas9-VP64/MPH基因穩(wěn)定表達(dá)的單克隆細(xì)胞株。使用時(shí)只需簡單地將啟動(dòng)子靶向的sgRNA或CRISPRa sgRNA文庫導(dǎo)入CRISPRa細(xì)胞系,是研究基因表達(dá)激活和基因篩選的理想方法。
在GeneHero? CRISPRa預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株中進(jìn)行SAM轉(zhuǎn)錄激活驗(yàn)證
如上圖所示,在表達(dá)dCas9-VP64和MPH復(fù)合物的HEK293細(xì)胞(Cat#SL302)中,用qPCR檢測(cè)了VEGFA(A)、EGFR(B)和HBG(C)的轉(zhuǎn)錄活性。轉(zhuǎn)導(dǎo)sgRNA的細(xì)胞株的擴(kuò)增曲線為綠色,無sgRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞為藍(lán)色,目的基因的轉(zhuǎn)錄水平與GAPDH的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了比較,通過與不轉(zhuǎn)染sgRNA的細(xì)胞系比較,表明目的基因在SL302中的轉(zhuǎn)錄倍數(shù)顯著上升。
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